{"title":"Desoxyribonucleinsuren: 9","body":"
<\/BR>Desoxyribonucleinsäuren<\/STRONG>
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<\/BR>Wichtige Parameter zur Charakterisierung von DNA
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<\/BR>a<\/STRONG> Die durch die heterocyclischen Basen bedingte Absorption<\/I> von UV-Licht<\/I> der Wellenlänge 260 nm, die häufig zur optischen Messung von DNA-Konzentrationen benutzt wird (Absorptionsspektrum<\/A>).
<\/BR>b<\/STRONG> Basenzusammensetzung<\/A> (AT-Gehalt<\/A>, GC-Gehalt<\/A>).
<\/BR>c<\/STRONG> Schwebedichte<\/I> bei Cäsiumchlorid-Dichtegradientenzentrifugation<\/A>. Die Schwebedichte, die für DNA im Bereich von 1,647 g\/cm3<\/SUP> (reine A-T-DNA) bis 1,795 g\/cm3<\/SUP> (reine G-C-DNA) liegt, zeigt lineare Abhängigkeit vom G-C-Gehalt und wird daher auch als Methode zur Bestimmung von DNA-Basenzusammensetzungen eingesetzt. Häufig zeigen sich im Cäsiumchlorid-Dichtegradienten neben einer Hauptbande eine oder mehrere Nebenbanden, die DNA-Fraktionen unterschiedlichen G-C-Gehalts darstellen: sie werden als Satelliten-DNA bezeichnet. Anzahl und Lage der Banden von Satelliten-DNAs sind charakteristisch für jede DNA-Spezies.
<\/BR>d<\/STRONG> Häufigkeit von Basennachbarschaften<\/A>.
<\/BR>e<\/STRONG> Kettenlängen,<\/I> bestimmbar durch Elektronenmikroskopie, durch das Laufverhalten bei Gelelektrophorese<\/A> und – heute weniger gebräuchlich – durch die Sedimentationsgeschwindigkeit bei Ultrazentrifugation (Ultrazentrifuge<\/A>). DNA-Kettenlängen werden vorwiegend in Anzahl von Basenpaaren (Abkürzung bp) oder Kilobasenpaaren (Abkürzung kbp oder auch kb) angegeben, seltener durch die entsprechenden relativen Molekülmassen (wobei für ein Basenpaar eine durchschnittliche relative Molekülmasse von 660 einzusetzen ist).
<\/BR>f<\/STRONG> Häufigkeit und Klassifizierung von Sequenzwiederholungen<\/I> (repeats<\/A>, repetitive DNA<\/A>). Diese sind bestimmbar durch Abbau von DNA mit Restriktionsendonucleasen zu den sich wiederholenden, aus nur wenigen oder bis zu mehreren hundert Basenpaaren bestehenden Sequenzeinheiten oder durch spezielle Hybridisierungstechniken. Zu letzteren zählt besonders die Messung der zeitlichen Abhängigkeit und der Konzentrationsabhängigkeit von Renaturierung einzelsträngiger, d. h. denaturierter DNA zu doppelsträngiger DNA (sog. Renaturierungskinetik, Cot-Wert<\/A>), da durch diese Methode die Bestimmung der Anteile an sog. \"unique\"-Sequenzen (in der betreffenden DNA nur einmal oder in wenigen Kopien – bis ca. 10mal – vertreten), mittelrepetitiven Sequenzen (Häufigkeit pro DNA 102<\/SUP> bis 105<\/SUP>) und hochrepetitiven Sequenzen (Häufigkeit 105<\/SUP> bis > 106<\/SUP>) möglich ist.
<\/BR>g<\/STRONG> Anzahl und relative Lage von Schnittstellen für<\/I> Restriktionsenzyme. Die Aufstellung sog. Restriktionskarten ist durch die Vielzahl der heute verfügbaren Restriktionsenzyme zur Routinemethode geworden. Die relativ kleine DNA von DNA-Viren und -Phagen kann oft einer direkten Restriktionskartierung unterzogen werden, da sie je nach Art der eingesetzten Restriktionsenzyme zu nur wenigen Fragmenten führt, deren Einordnung zu einer Karte nur geringe Schwierigkeiten bereitet. Dagegen ist für die Kartierung von DNA aus komplexeren Genomen eine vorherige Anreicherung durch Klonierung<\/A> (Gentechnologie<\/A>) erforderlich.
<\/BR>h<\/STRONG> Sequenzanalyse<\/A>:<\/I> die in der zweiten Hälfte der 1970er Jahre entwickelten Methoden zur Sequenzanalyse von DNA ermöglichen die Charakterisierung von DNA auf der Ebene der Monomerbausteine und damit eine Höchstauflösung bezüglich des Informationsgehalts. In Anbetracht der enormen Kettenlängen von DNA war es bis in die 1970er Jahre nicht möglich, einzelne Abschnitte (Gene) direkt zu isolieren und einer Sequenzanalyse zu unterziehen. Den Weg dazu eröffneten die Methoden der Klonierung bzw. spezifischen Spaltung in definierte Fragmente mit Hilfe von Restriktionsendonucleasen. Diese Methoden zusammen mit den Methoden der Sequenzanalyse ermöglichen heute die strukturelle und auch funktionelle Feinanalyse von DNA bzw. von Genen im Rahmen der modernen Gentechnologie<\/A>. Nachdem ursprünglich gezielt einzelne Gene sequenziert wurden, ging man bald dazu über, ganze Genome zu analysieren, zunächst die kleineren Genome von Zellorganellen sowie von Viren und Bakteriophagen. Inzwischen wurden im Rahmen des Genomprojekts<\/A> die Genome mehrerer Organismen, von Bakterien, Pflanzen, Pilzen und Tieren – hauptsächlich von Modellorganismen<\/A> – vollständig sequenziert (Genomik<\/A>).
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