{"title":"Gensynthese: Abbildung I","body":"
\n\n
\nGensynthese<\/STRONG>
<\/BR>
<\/BR>Zur Synthese von Genen ist die Kenntnis ihrer Nucleotidsequenzen Voraussetzung. Entsprechend der jeweiligen Sequenz (im Schema nicht aufgeführt) werden zunächst Desoxyoligonucleotide der Kettenlängen 10–30 mit Hilfe organisch-chemischer Methoden aus Mononucleotiden synthetisiert (a<\/STRONG>), wobei die einzelnen Synthesen so programmiert werden, daß Nachbarfragmente (z.B. 1 bis 5 bzw. 1' bis 5' im Schema) beider Stränge entstehen, welche die Überlappung der jeweiligen Lücken des Gegenstrangs (Prinzip der versetzten Lücken) aufgrund der Basenpaarungs-Spezifität ermöglichen. Nach Hybridisierung dieser Fragmente zu einer Doppelstrangstruktur (b<\/STRONG>) mit versetzten Einzelstrangbrüchen werden letztere unter der katalytischen Wirkung von DNA-Ligasen unter ATP- oder NAD-Spaltung verschlossen, wodurch ein durchgehender DNA-Doppelstrang (c<\/STRONG>) entsteht. Die Synthese erfolgt durch Auswahl entsprechender Sequenzen so, daß die Enden des Produkts (c<\/STRONG>) einzelsträngig bleiben und gleichzeitig die für ein bestimmtes Restriktionsenzym spezifischen Sequenzen enthalten, wodurch die Klonierung in die entsprechende Restriktionsstelle eines Klonierungsvektors ermöglicht wird. Da Gene heute meist in klonierter Form, d.h. letztlich aus der DNA der betreffenden Organismen isoliert, zugänglich sind, werden häufig nicht die vollständigen Gene, sondern nur diejenigen Bereiche, die gezielt abgewandelt werden sollen (z.B. durch Koppelung an andere Signalstrukturen), neu synthetisiert."}