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Lexikon der Biochemie: Dünnschichtchromatographie

Dünnschichtchromatographie, DC, eine Mikromethode der Adsorptionschromatographie auf dünnen Schichten (Flachbettmethode). Als Trennschichten dienen Adsorbenzien wie Kieselgel oder Aluminiumoxid mit oder ohne Gipszusatz. Sie werden auf Glasplatten oder Aluminiumfolien gegossen oder mit einem Streichgerät aufgebracht und anschließend aktiviert, die Schichtdicke beträgt 250-300 mm. Die Substratmengen liegen bei 1-3mg und werden wie bei der Papierchromatographie dosiert. Auf ähnliche Weise erfolgt auch die Entwicklung der Chromatogramme und die Sichtbarmachung der Substanzflecke. Die Trennzeiten sind geringer als bei der Papierchromatographie und liegen bei 30-60 Minuten.
D. wird vorwiegend nach der aufsteigenden Methode ein- oder zweidimensional betrieben. Die Entwicklung der Chromatogramme erfolgt in N-Kammern (Normalkammer >3mm Gasraum) oder in ideal gesättigten S-Kammern (Schmalkammer <3mm Gasraum). Gegenüber der Papierchromatographie kann man auch mit Schicht- oder Lösungsmittelgradienten arbeiten und die getrennten Komponenten vor einer zweiten Trennung reaktiv verändern. Diese Methode wird TRT- (Trennen-Reagieren-Trennen-) Technik genannt. Für die präparative D. verwendet man 1-2mm dicke Schichten und dosiert im Bereich von 5-50 mg.
Die Auswertung der D. erfolgt wie bei der Papierchromatographie. Zusätzlich kann man durch Erhitzen, Iodbedampfung oder Behandlung mit konz. Schwefelsäure eine Sichtbarmachung von Substanzflecken erreichen.
Durch Verwendung von Adsorbenzien mit kleinerem Korngrößenbereich und dünneren Schichten wird eine wesentliche Verringerung der Trennstufenhöhe erreicht (Hochleistungsflüssigkeitschromatographie). Die als horizontale Methode betriebene Hochleistungsdünnschichtchromatographie (engl. high performance thinlayer chromatography, HPTLC) kann linear oder zirkular (U-Kammer) angewendet werden. Dabei verkleinern sich die chromatographischen Parameter (Trennstufenhöhe, Analysenzeit) um etwa eine Zehnerpotenz.

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