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Lexikon der Biochemie: USERIA

USERIA, Abk. für engl. ultrasensitive enzymatic radioimmunoassay, ultrasensitiver Enyzmradioimmunassay, ein Immunassay unter Verwendung einer Kombination von Radioisotopen- und Enzymmarkierungen (Immunassays). Die Kombination von RIA und ELISA wurde gelegentlich verwendet, um für ein gegebenes Antigen (X) einen Test zu gestalten, der bis zu drei Größenordnungen empfindlicher ist als jede einzelne dieser Techniken für sich selbst. Für diesen Test werden drei verschiedene Antikörper benötigt: 1) ein Antikörper gegen X (anti-X1), der an einen festen Träger gebunden ist, 2) ein zweiter Antikörper gegen X, der an eine andere Stelle des X-Moleküls bindet (anti-X2) und 3) ein mit alkalischer Phosphatase markierter Antikörper, der an die Fc-Region von anti-X2 bindet (anti-[anti-X2]-alkalische Phosphatase), gemeinsam mit [3H]Adenosin-5'-monophosphat, einem Substrat der alkalischen Phosphatase, das zu [3H]Adenosin und Orthophosphat hydrolysiert wird. Der Test besteht aus folgender Abfolge von Schritten: a) die Lösung, die eine unbekannte Konzentration an X enthält, wird zu dem festkörpergebundenen anti-X1 gegeben, wodurch sich gebundenes anti-X1-X bildet, b) nicht gebundenes X wird ausgewaschen, c) eine Lösung, die überschüssiges anti-X2 enthält, wird hinzugefügt, wodurch gebundenes anti-X1-X-anti-X2 entsteht, d) nichtgebundenes anti-X2 wird weggewaschen, e) eine Lösung, die überschüssige anti-[anti-X2]-alkalische Phosphatase enthält, wird zugegeben, wodurch gebundenes anti-X1-X-anti-X2-anti-[anti-X2]-alkalische Phosphatase entsteht, f) nichtgebundene anti-[anti-X2]-alkalische Phosphatase wird ausgewaschen, g) eine Lösung, die überschüssiges [3H]Adenosin-5'-monophosphat enthält, wird hinzugefügt und die Mischung eine geeignete Zeit lang inkubiert, während der [3H]Adenosin gebildet wird, h) die lösliche Phase der Inkubationsmischung, die jetzt [3H]Adenosin, Orthophosphat und restliches, nichthydrolysiertes [3H]Adenosin-5'-monophosphat enthält, wird auf eine Chromatographiesäule überführt, das [3H]Adenosin von den anderen Komponenten abgetrennt, gesammelt und dessen Radioaktivität gemessen. Es wird eine Standardkurve der "Radioaktivität in [3H]Adenosin" gegen "log Konzentration von X" erstellt und daraus die Konzentration von X ermittelt. [T.J. Ngo u. H.M. Lenhoff (Hrsg.), Enzyme-Mediated Immunoassay, Plenum New York, 1985; S.B. Pal (Hrsg.), Immunoassay Technology, Bd. 1 (1985) und 2 (1986), Walter de Gruyter, Berlin; D.W. Chan u. M.T. Perlstein (Hrsg.), Immunoassay: A Practical Guide, Academic Press, New York, 1987; L.J. Krickla J. Clin. Immunoassay 16 (1993) 267-271]

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