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Lexikon der Biologie: Agardiffusionstest

Agardiffusionstest, 1) Immunodiffusionstest, immunchemische Methode zur Erfassung von Antigen-Antikörper-Reaktionen in Agarmedien (Agar), in denen es zu einer Lokalisation der Präzipitate (Immunpräzipitation) kommt, was eine qualitative oder quantitative Analyse des Testsystems ermöglicht. Man unterscheidet Einfach- und Doppeldiffusion. Bei der erstgenannten Methode diffundiert (Diffusion) nur ein Reaktionspartner, bei letzterer alle. a) lineare Einfachdiffusion: das in einem Reagenzglas gegossene, Antiserum enthaltende Agargel wird mit Antigenlösung (Antigene) überschichtet. Reagieren Antikörper und Antigene miteinander, kommt es zur Ausbildung eines oder mehrerer Präzipitatringe (Ringtest), deren Entfernung vom Ausgangspunkt (Oberfläche des Agargels) gemessen werden kann und mit Hilfe einer Eichgeraden eine Aussage über die Antigenkonzentration erlaubt (Oudin-Test, Oudin-Immunodiffusion). b) radiale Einfachdiffusion: das Antiserum enthaltende Agargel wird auf einer Glasscheibe gegossen. Nach Erstarren werden Vertiefungen in das Gel gestanzt, in die die Antigenlösung eingefüllt wird. Die Reaktion mit dem Antiserum ergibt ringförmige Präzipitate, deren Durchmesser eine quantitative Antigenbestimmung ermöglicht (Mancini-Technik). c) radiale Doppeldiffusion: Technik zur gleichzeitigen, vor allem qualitativen, Analyse mehrerer Antigen-Antikörper-Systeme (Ouchterlony-Test). Hierbei wird eine Glasplatte mit Agargel beschichtet, so daß Antigene und Antiseren, die in verschiedene in den Agar gestanzte Löcher appliziert werden, aufeinander zu diffundieren können. Präzipitationslinien entstehen dort, wo Antigen und Antikörper in äquivalenten Konzentrationen aufeinandertreffen. So kann über Identität, Nicht-Identität bzw. partielle Identität verschiedener Antigene entschieden werden. Bei der Immunelektrophorese wird die Doppeldiffusionstechnik mit einem vorangestellten Elektrophoreseschritt (Elektrophorese) kombiniert; sie ist zur Analyse komplexer Systeme, z. B. eines artfremden Serums, geeignet. – Diese Techniken dienen der Charakterisierung und Quantifizierung von Antigen, Inhaltsstoffen, Molekülen usw. und sind heute durch verbesserte immunchemische Methoden, wie z. B. ELISA, ersetzt. (vgl. Abb.)
2) Plattendiffusionstest, Diffusionstest, Diffusionsplattentest, ein Testsystem, um die Fähigkeit von Mikroorganismen zur Bildung von Antibiotika oder um die Wirksamkeit bestimmter Antibiotika auf Mikroorganismen (Krankheitserreger) festzustellen (Antibiogramm; Antibiotika ). Dazu benutzt man Agarplatten, die einen Testorganismus gleichmäßig suspendiert enthalten. Die Testlösungen (Ausscheidungsprodukte von Mikroorganismen, bekannte Antibiotika) werden in ausgestanzte Löcher eingefüllt (Lochtest), in kleine Metallzylinder auf der Oberfläche pipettiert (Zylindertest) oder in Filterpapierscheibchen aufgesogen und zur direkten Diffusion auf den Agar gelegt (Scheibchentest). Nach Bebrütung der Platten läßt sich bei Vorliegen eines wirksamen Antibiotikums eine Hemmzone (Hemmhof) um die aufgetragene Testlösung feststellen, innerhalb der der Testorganismus nicht wachsen konnte. Der Durchmesser dieser Hemmzone ist der Wirksamkeit und Konzentration des Antibiotikums proportional. Immunassays.

B.L./R.We.


Agardiffusionstest

1 Lineare Einfachdiffusion (Oudin-Immunodiffusion): ein antikörperhaltiges Agargel wird mit dem zu testenden Patientenserum überschichtet. Enthält das Serum ein spezifisches Antigen, kommt es im Gel an einer bestimmten Stelle zu einer Antigen-Antikörper-Reaktion und damit zu einer ringförmigen Trübung. Die Diffusions- oder Wanderstrecke zwischen Geloberfläche und Präzipitat kann ausgemessen und die Konzentration des Antigens mit Hilfe einer Bezugskurve (Eichgeraden) bestimmt werden.
2 Radiale Einfachdiffusion (Mancini-Technik): a mit Antikörper-haltigem Agargel beschichtete Platte, auf die in Stanzlöchern die Testseren aufgebracht werden; b Präzipitationsringe nach erfolgter Immunodiffusion; deren Durchmesser hängt von der Antigenkonzentration ab; c Standardkurve, anhand derer die Antigenkonzentration in der Testlösung ermittelt werden kann. A, B, C: Standardlösungen.
3 Radiale Doppeldiffusion (Ouchterlony-Test):Im Fall 1 verschmelzen die Präzipitationslinien, da die Antigene (AG) identisch sind; bei 2 überschneiden sie sich wegen ihrer Verschiedenheit; im Fall 3 trägt das Antigen 1* nur einen Teil der Spezifitäten des Antigens 1, der Antikörper (AK) ist jedoch gegen alle Spezifitäten von AG 1 gerichtet. Die charakteristische Spornbildung zeigt die teilweise Übereinstimmung der antigenen Spezifitäten an.
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