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Lexikon der Biologie: Blaue Nativ-Polyacrylamid-Gelelektrophorese

Blaue Nativ-Polyacrylamid-Gelelektrophorese w, blue native PAGE, Elektrophorese-Technik, die zur Isolierung und nativen Auftrennung von Membranproteinen entwickelt wurde, jedoch auch zur Analyse löslicher Proteine und Proteinkomplexe geeignet ist. Grundlage der Methode ist die Verwendung des Farbstoffs Coomassie-Brillantblau, der entweder in das native Trenngel mit eingegossen oder dem Kathodenpuffer zugesetzt werden kann. Während der Elektrophorese werden kontinuierlich die zur Solubilisierung der Membranproteine verwendeten nicht-ionischen Detergentien durch Coomassie-Brillantblau ersetzt. Der Farbstoff bindet an hydrophobe Bereiche von Proteinen und gibt ihnen eine negative Grundladung – analog dem SDS in denaturierenden Gelsystemen (SDS-Polyacrylamid-Gelelektrophorese). Daher wandern auch basische Proteine zur Anode, die ansonsten wegen ihrer positiven Ladung zur Kathode wandern bzw. gar nicht erst in das Gel einlaufen würden. Außerdem werden mit dieser Methode Proteine bereits während der Auftrennung sichtbar, können aus dem Gel ausgeschnitten und unter nativen Bedingungen eluiert werden.

M.B.

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