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Lexikon der Biologie: Differential Display

Differential Display, von A.B. Pardee und P. Liang 1992 eingeführte Methode zur Identifizierung von Genen, deren Expression in verschiedenen Zellpopulationen oder unter verschiedenen Zellkulturbedingungen variiert (differentielle Genexpression). Der direkte Vergleich von RNA-Profilen mittels Gelelektrophorese ist nicht praktikabel, da sich die komplexen RNA-Gemische von Zellen kaum voneinander trennen lassen und nur in geringer Menge vorkommende Transkripte schwer analysierbar sind. Diese Probleme können mit einigen Zwischenschritten gelöst werden. Voraussetzung ist die Gewinnung absolut DNA-freier RNA aus den zu untersuchenden Zellen; mit der weiteren Aufreinigung von poly(A)-RNA kann die Reproduzierbarkeit erheblich gesteigert werden. Die RNA wird in cDNA umgeschrieben; anschließend werden mittels PCR (Polymerase-Kettenreaktion) unter Verwendung bestimmter primer Anteile der cDNA amplifiziert. Die nun gegenüber der Gesamt-RNA geringere Komplexität ermöglicht die Analyse durch Polyacrylamid-Gelelektrophorese. Differentiell exprimierte Transkripte können aus dem Gel extrahiert, kloniert (Klonierung) und einer Sequenzanalyse unterworfen werden. Sie können auch als Gensonden für die Northern- und Southern-Hybridisierung und zur Isolierung von Genen aus Genbanken (Genbibliothek) dienen. Nach Ableitung der Aminosäuresequenz ist auch die Herstellung spezifischer Antikörper möglich. Im Vergleich zu anderen Methoden zur Identifizierung unterschiedlich exprimierter Gene, wie der differentiellen Hybridisierung und der Subtraktionshybridisierung (subtraktive cDNA-Bibliothek), ist das Differential Display empfindlicher und schneller. Verbunden mit der hohen Sensitivität sind allerdings Nachteile, wie z. B. eine niedrige Reproduzierbarkeit und ein hoher Anteil an falsch positiven Klonen.

M.B.

Copyright 1999 Spektrum Akademischer Verlag, Heidelberg

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