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Lexikon der Biologie: Direkt-blotting-Elektrophorese

Direkt-blotting-Elektrophorese, Bezeichnung für eine Methode, bei der während der Gelelektrophorese von Nucleinsäure-Fragmenten diese direkt aus dem Gel auslaufen und auf einen Träger (meist eine Nylon-Membran, Nylon-Filter) übertragen werden ( vgl. Abb. ). Hierbei wird die entsprechende Blotting-Membran eng am unteren Ende des (vertikal laufenden) Gels während des Gellaufs mit einer konstanten Geschwindigkeit entlanggeführt und nimmt so die aus dem unten offenen Gel austretenden, ihrer Größe nach aufgetrennten Nucleinsäure-Fragmente auf. Die erhaltene Membran entspricht in ihrer weiteren Verwendbarkeit einer bei einem Southern-Blot erhaltenen Membran. Aufgrund der vielfältigen Regulationsmöglichkeiten (verschiedene Auftrennbedingungen kombiniert mit verschiedenen Geschwindigkeiten der sich bewegenden Membran) kann diese Technik eine sehr hohe Auflösung von Fragmentlängen erreichen und daher auch zur Sequenzierung von DNA unter Verwendung von nicht-radioaktiven Nachweisverfahren durch Nachweis der Sequenzbanden auf der Membran (wie bei der Southern-Technik) eingesetzt werden. blotting-Techniken.



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