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Lexikon der Biologie

DNA-Synthesizer

DNA-Synthesizer m, Gerät, das die automatisierte Synthese definierter Oligonucleotide durchführt. Die Synthese erfolgt an einer festen Matrix, was eine leichte Abtrennung der überschüssigen Substrate nach jedem Reaktionsschritt erlaubt ( vgl. Abb. ). Die Synthese startet an dem Nucleotid, welches das 3´-Ende des Produkts bilden soll und das über einen linker an die Matrix gekoppelt wurde (Festphasensynthese). Die 5´-Hydroxylgruppe dieses Nucleotids ist mit einer Dimethoxytritylgruppe (DMTr) blockiert. Bevor das zweite Nucleotid angekoppelt werden kann, wird das DMTr des ersten Nucleotids durch Säure entfernt und das zweite Nucleotid-DMTr-Derivat aktiviert. Nun erfolgt die Addition des zweiten Nucleotids an das erste. Im Anschluß wird die entstehende Phosphitbindung zu der stabileren Phosphat-Nucleotidbindung oxidiert. Danach wird das DMTr des zweiten Nucleotids entfernt, und der Zyklus wird wiederholt, bis die gewünschte Kettenlänge erreicht ist. Die zugegebenen Reagenzien werden nach jedem Reaktionsschritt wieder entfernt, bevor der nächste eingeleitet wird. Um biologisch aktive DNA (Desoxyribonucleinsäuren) zu erhalten, werden nach der eigentlichen Synthese die Oligonucleotide von der Matrix abgetrennt und die restlichen Schutzgruppen entfernt. Das Gerät kann 4–6 Kopplungen pro Stunde durchführen und Produkte bis zu einer Länge von ca. 150 Nucleotiden herstellen. Auch die Synthese von RNA-Oligonucleotiden oder modifizierten Oligonucleotiden ist möglich. Oligonucleotide finden in der molekularbiologischen Forschung vielfältige Verwendung. Hybridisierungsprobe, primer.



  • Die Autoren
Redaktion

Rolf Sauermost (Projektleiter)
Doris Freudig (Redakteurin)

Erweiterte Redaktion

Dr. Michael Bonk (Assistenz)
Dr. Andreas Sendtko (Assistenz)
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Grafik:

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Rudolf Kempf (EDV)
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Rolf Sauermost (EDV)
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CD-ROM-Ausgabe:

Doris Freudig (Redaktion und Konzeption)
Richard Zinken (Beratung)

Berater

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Prof. Dr. Uwe Maier (Biochemie, Molekularbiologie)
Prof. Dr. Günther Osche (Zoologie)
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Autoren

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