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Lexikon der Biologie: Endmarkierung von DNA-Fragmenten

Endmarkierung von DNA-Fragmenten. Eine radioaktive Endmarkierung am 5'-Ende eines DNA-Fragments erzielt man gewöhnlich durch Übertragung des γ-Phosphats von γ-32P-ATP auf ein vorher durch alkalische Phosphatase dephosphoryliertes DNA-Fragment mit Hilfe der T4-Polynucleotid-Kinase. Eine radioaktive Markierung des 3'-Endes erhält man durch Verwendung der terminalen Transferase, der T4-DNA-Polymerase oder des Klenow-Fragments der DNA-Polymerase I jeweils in Verbindung mit α-32P-Nucleosidtriphosphaten. Endmarkierte DNA-Fragmente werden z.B. für die Sequenzierung, band shift oder footprints eingesetzt. Gentechnologie, indirekte Endmarkierung.

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