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Lexikon der Biologie: Fill-in-Reaktion

Fill-in-Reaktion, Bezeichnung für die enzymabhängige Auffüllreaktion einzelsträngiger überhängender 5'-Enden von DNA-Molekülen zum DNA-Doppelstrang. Für die Fill-in-Reaktion benötigt man eine DNA-Polymerase oder ein Klenow-Enzym (Klenow-Fragment)und die 4 2'-Desoxyribonucleosid-5'-triphosphate. Bei gentechnischen Arbeiten (Gentechnologie) wird die Fill-in-Reaktion angewandt, um nicht-kompatible überhängende Enden (sticky ends), die jedoch miteinander ligiert werden sollen, zunächst in stumpfe Enden (blunt ends) umzuwandeln. Die so generierten stumpfen Enden können nun direkt durch eine Ligase verknüpft werden. Außerdem wird die Fill-in-Reaktion u.a. auch zur Endmarkierung von DNA-Fragmenten eingesetzt, wobei eines der benutzten Desoxynucleosidtriphosphate (radioaktiv) markiert ist.

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