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Lexikon der Biologie: Fluoreszenz-in-situ-Hybridisierung

Fluoreszenz-in-situ-Hybridisierung w, Abk. FISH, nichtradioaktives Verfahren der in-situ-Hybridisierung. Die Hybridisierungssonden sind kovalent mit nichtradioaktiven Markermolekülen (Marker) wie z.B. Biotin oder Digoxigenin verknüpft. Die Detektion der Hybridisierungsereignisse erfolgt mittels eines primären Antikörpers, der gegen das Markermolekül gerichtet ist. An diesen ist ein Fluorochrom, z.B. Fluoresceinisothiocyanat (FITC; Fluorescein) oder Rhodamin, gebunden. Zur Signalverstärkung kann nun ein sekundärer Antikörper, der gegen den primären Antikörper gerichtet ist, angelagert werden. Der sekundäre Antikörper ist entweder mit weiteren Fluorochromen oder mit dem entsprechenden Markermolekül gekoppelt. In diesem Fall kann zur weiteren Verstärkung des Signals erneut mit dem primären Antikörper inkubiert werden. Die Signale lassen sich anschließend im Lichtmikroskop nachweisen. Die FISH eignet sich u.a. zur physikalischen Kartierung von Genen und genomischen Markern an Metaphase-Chromosomen, nach Präparation dekondensierter DNA bzw. Chromatinfasern zur Feinkartierung von Genen (Fiber-FISH). Bei Verwendung von DNA-Sequenzen, die mehrmals in einem Chromosom (nicht im gesamten Genom!) vorkommen, sowie von komplexen Proben mit differentiell markierten Sonden (Vielfarben-FISH) können numerische und strukturelle Chromosomenanomalien festgestellt werden, was im Rahmen der pränatalen Diagnostik zum Einsatz kommt.

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