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Lexikon der Biologie: Fluoreszenzmarkierung

Fluoreszenzmarkierung w, Fluoreszenzfärbung, Methode zur Detektion und Lokalisierung spezifischer Biomoleküle (z.B. in der Fluoreszenzmikroskopie), die auf der Einführung fluoreszierender Gruppen mittels chemischer Modifikation oder – heute überwiegend – auf cytochemischen Immunmarkierungstechniken basiert. Dabei werden Fluoreszenzfarbstoffe (Fluorochrome) chemisch an spezifisch wirkende Antikörper gebunden. Über die Fluoreszenzintensität (Fluoreszenz) lassen sich so Lokalität und Dichte der nachzuweisenden Substanz direkt ermitteln (direkte Immunfluoreszenz). Um Substanzen, die nur in Spuren vorkommen, nachweisen zu können, wird die Markierung über einen zweiten Antikörper realisiert, der entweder den ersten, für die nachzuweisende Substanz spezifischen Antikörper oder an eine Hybridisierungssonde gebundene Markermoleküle (z.B. Biotin oder Digoxigenin) erkennt (indirekte Immunfluoreszenz). Durch diesen zweistufigen Markierungsprozeß läßt sich die Anzahl von Fluoreszenzmarkern vervielfältigen und damit die Empfindlichkeit deutlich erhöhen. Die direkte chemische Modifizierung von Proteinen und Nucleinsäuren erfolgt bevorzugt über Aminogruppen; fluoreszierende Gruppen werden über Isothiocyanate (z.B. Fluoresceinisothiocyanat; Fluorescein), Succinimidylester oder Sulfonylchloride (z.B. Dansylchlorid; Dansylierung) gebunden. Über die spektrale Verschiebung der Fluoreszenzspektren in Abhängigkeit von der Farbstoffumgebung lassen sich molekulardynamische Effekte nachweisen (Fluoreszenz-Korrelations-Spektroskopie, Fluoreszenzspektroskopie).

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