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Lexikon der Biologie: Immunassays

Immunassays, Immunoassays, Testmethoden, bei denen Bestandteile des Immunsystems, meist Antikörper, als Nachweisreagenzien dienen (Immundiagnostik). Die Spezifität der Antikörper für „ihr“ spezifisches Antigen kann dabei ausgenutzt werden, um dieses Antigen in einer Mischung oder in Gewebeschnitten zu identifizieren (qualitativer Immunassay), oder aber, um die Menge des Antigens zu bestimmen (quantitativer Immunassay). Der Agardiffusionstest kann qualitativ oder quantitativ durchgeführt werden (Mancini-Technik). Bei der Immunelektrophorese werden die Bestandteile des Antigen-Gemisches, in dem sich das spezifische Antigen befindet, vorher durch eine Gelelektrophorese voneinander getrennt. Der Nachweis erfolgt wie beim Agardiffusionstest durch eine Präzipitation (Immunpräzipitation) im Äquivalenzbereich (Präzipitationskurve). In einem Immunoblot sowie bei der Immunfluoreszenz, bei einem ELISA und einem Radioimmunassay ist der Antigen-spezifische Antikörper oder ein zweiter Antikörper, der diesen erkennt, markiert. Im ersten Fall spricht man von direkten, im zweiten Fall von indirekten Nachweismethoden. Fluoreszenz-markierte Antikörper gegen Oberflächenstrukturen von Zellen können auch benutzt werden, um Zellen eines Zellgemisches voneinander zu trennen (Durchflußcytometrie; FACS). Um die Frequenz von Zellen mit Spezifität für ein bestimmtes Antigen in einem Zellgemisch (etwa einer Suspension von Milz-Zellen oder Lymphknoten-Zellen) zu bestimmen, werden die Jerne-Plaque-Technik (Plaque-Test) oder die Grenzwert-Verdünnung (limiting dilution analysis) benutzt. T-Lymphocyten werden durch ihre Proliferation in Anwesenheit eines Mitogens (Concanavalin A) oder in Gegenwart eines Antigens nachgewiesen (in diesem Fall proliferieren nur die Antigen-spezifischen Lymphocyten). Die Proliferation wird üblicherweise durch den Einbau radioaktiven Thymidins in die DNA proliferierender Zellen gemessen. Cytotoxische T-Lymphocyten lassen sich durch Cytotoxizitätstests nachweisen, etwa in einer Lymphocyten-Mischkultur. Die für viele dieser Tests notwendige Reinigung der spezifischen Antikörper kann mit Hilfe einer Affinitätschromatographie erfolgen, bei der das Antigen an die Säulen-Matrix gekoppelt ist. Wenn der spezifische Antikörper bereits in genügend reiner Form vorliegt, kann er von anderen Proteinen mittels einer Protein-A- (Protein A) oder Protein-G-Säule (Protein G) gereinigt werden (z.B. aus Kulturüberständen von Hybridomen). Solche gereinigten Antikörper stehen für eine Vielzahl medizinischer Tests zur Verfügung, bei denen Patienten auf das Vorhandensein bestimmter Antigene hin untersucht werden (z.B. Immunszintigraphie). Andere medizinische Tests dienen der Untersuchung des Immunstatus eines Patienten. Immunität gegen bestimmte Antigene (Mantoux-Test, Tuberkulinreaktion) und oder eine Neigung zu Überempfindlichkeitsreaktionen (Radioimmunosorbent-Test, Epikutantest, Scratch-Test) können so festgestellt werden. Affinitätschromatographie, blotting-Techniken, Festphasen-Immunassay.

U.T.

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