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Lexikon der Biologie: Immunhistochemie

Immunhistochemie w, Nachweis und Lokalisation von Antigenen in Geweben mit Hilfe von spezifischen Antikörpern. Bei der direkten Immunhistochemie sind an die Antikörper Enzyme (z.B. alkalische Phosphatase, Meerrettich-Peroxidase) für eine Farbreaktion oder fluoreszierende Partikel (Immunfluoreszenz) gekoppelt. Im Fall der indirekten Immunhistochemie ( vgl. Abb. ) werden die primären, an das Antigen gebundenen Antikörper durch sekundäre, markierte Antikörper erkannt. Eine heute recht häufig angewandte alternative Markierungstechnik ist die Avidin-Biotin-Komplex-Methode. Da Avidin (wie auch Streptavidin) 4 Biotinmoleküle (Biotin) hochspezifisch binden kann, eignet es sich hervorragend als molekulare Brücke zwischen Biotin-konjugierten (biotinylierten) Antikörpern und Enzymen. Verfahren mit Enzym-vermittelten Farbreaktionen haben den Vorteil, daß sie mit anderen spezifischen, lichtmikroskopischen Färbemethoden kombiniert werden können, während für die Immunfluoreszenzmikroskopie ein spezielles Dunkelfeldmikroskop (Epifluoreszenzmikroskop, Fluoreszenzmikroskopie) notwendig ist. In der Elektronenmikroskopie (Elektronenmikroskop) werden mit Goldpartikeln konjugiertes Protein A oder Protein G, die sich mit hoher Spezifität an das Antikörperprotein binden, eingesetzt (Protein-A-Gold-Markierung; vgl. Abb. ). Immunhistochemische Verfahren am nativen Gewebe sind wegen der schlechten Gewebepenetration der großen Antikörpermoleküle und der ebenso schlechten Auswaschung ungebundener Reagenzien problematisch. Fixierte Gewebeschnitte sind diesbezüglich einfacher zu handhaben, fixierungsbedingte Verluste an antigenen Determinanten können durch enzymatische Vorbehandlung oder Ätzen größtenteils ausgeglichen werden. Histochemie.



Immunhistochemie

1 Indirekte Immunhistochemie mit enzymatischem Nachweis. Hier ist der erste Antikörper unmarkiert. Ein zweiter Antikörper bindet spezifisch an den ersten Antikörper. Wie bei der direkten Methode erfolgt die Detektion über Fluoreszenz oder (hier dargestellt) ein Markerenzym, das ein gefärbtes Reaktionsprodukt herstellen kann. 2 Elektronenmikroskopische Immuncytochemie, Post-embedding-Verfahren. Kolloidales Gold ist mit Protein A ummantelt, das spezifisch an den Fc-Teil von Antikörpern bindet. Diese binden wiederum entweder spezifisch oder – über das Protein A – unspezifisch an einen ersten Antikörper. Die Goldpartikel sind elektronendicht und können elektronenmikroskopisch dargestellt werden.

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