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Lexikon der Biologie: Immunoscreening

Immunoscreening s, Antikörper-Screening, molekularbiologisches Verfahren, mit dessen Hilfe Klone (Bakterien oder Bakteriophagen) identifiziert werden können, die ein in einen Expressionsvektor kloniertes Gen enthalten und dieses (eventuell erst nach Induktion) exprimieren. Zur Identifizierung des Produkts des gesuchten Gens und somit des zugrundeliegenden Klons werden Antikörper gegen das entsprechende Protein eingesetzt. Durch Immunoscreening können z.B. Expressionsbibliotheken nach Genen durchsucht werden, wenn die Genprodukte gereinigt und zur Herstellung von spezifischen Antikörpern eingesetzt werden konnten. Wird z.B. mit einer auf einem Phagen basierenden Genbibliothek wie λgt11 oder einer ähnlichen Expressionsbibliothek gearbeitet, kann durch Isopropyl-β-thiogalactosid die Expression von Fusionsproteinen induziert werden. Nach Transfer der Plaques auf eine Nitrocellulose- oder Nylon-Membran (Nylon-Filter) kann das in den Plaques eventuell vorliegende, durch die Lyse der Wirtsbakterien freigewordene (Fusions-)Protein mit Hilfe des vorliegenden Antikörpers (meist unter Vermittlung eines radioaktiv markierten oder mit einem Enzym konjugierten sekundären Antikörpers) nachgewiesen werden ( vgl. Abb. ). Die in der Antigen-Antikörper-Reaktion positiven λgt11-Phagenplaques werden zur weiteren Klonierung und Untersuchung des Gens isoliert.



Immunoscreening

Immunoscreening einer Phagen-Expressionsbibliothek

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