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Lexikon der Biologie: in-vitro-Transkription

in-vitro-Transkription w, spezifische in-vitro-Synthese von RNA-Transkripten klonierter Gene oder zellulärer DNA. Im ersten Fall kann die Protein-codierende cDNA-Sequenz (cDNA) in einem Klonierungsvektor hinter einen Promotor spezifisch für T3-, T7- oder SP6-Polymerase (SP6-RNA-Polymerase, T7-RNA-Polymerase) kloniert werden. Die entsprechende RNA-Polymerase ist dann in der Lage, in Gegenwart eines Gemisches von Ribonucleotiden durch Transkription der DNA-Matrize die gewünschte mRNA zu synthetisieren. Die synthetisierte mRNA-Spezies kann im folgenden z.B. als Hybridisierungsprobe oder zur in-vitro-Translation (in-vitro-Translationssysteme) verwendet werden. Damit ist es möglich, mit Hilfe von in-vitro-Transkription und in-vitro-Translation spezifisch Genprodukte im zellfreien System zu erzeugen. Die in-vitro-Transkription klonierter Gene sowie zellulärer DNA kann außerdem genutzt werden, um die Funktion trans-aktiver Proteinkomponenten bei der Transkription zu untersuchen, die Aktivität von Wildtyp-Promotoren mit mutagenisierten Promotoren zu vergleichen oder die Transkriptionsaktivität zelleigener RNA-Polymerasen zu analysieren. Gentechnologie, Nuclear-run-on-Transkription, run-off-Transkription.

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