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Lexikon der Biologie: in vivo expression technology

in vivo expression technology w, Abk. IVET, Methode, die es erlaubt, in vivo bakterielle Gene zu untersuchen, die erst im lebenden Organismus aktiv werden. Die IVET-Strategie beginnt mit einem bakteriellen Salmonella-Stamm (Salmonella), der eine Mutation im PurA-Gen aufweist. Das PurA-Gen ist für einen erfolgreichen Infektionsablauf unentbehrlich. In diesen mutanten Stamm wurde ein Plasmid eingebracht, auf dem sich ein promotorloses (Promotor), nicht mutiertes, an das Reportergen lacZ fusioniertes PurA-Gen befindet. Vor das PurA-Gen wurden genomische Restriktionsfragmente des Salmonella-Stamms kloniert. Über homologe Rekombination wird das Plasmid in das Bakterienchromosom integriert. Sind unter diesen DNA-Konstrukten eine oder mehrere Kombinationen vorhanden, in denen dem PurA-Gen ein DNA-Fragment vorgelagert ist, das dazu fähig ist, die Infektion auszulösen, dann überleben diese markierten Bakterienstämme. Labormäuse werden mit auf diese Weise genetisch veränderten Salmonella-Stämmen infiziert, und nach 3 Tagen werden überlebende Salmonella-Stämme aus der Maus isoliert und analysiert. Wachsen in der künstlichen Umwelt einige Stämme schlechter, weisen diese Stämme offenbar Komponenten auf, die nur im lebenden Organismus voll aktiv sind. Diese Methode kann bei der Entwicklung neuer Impfstoffe eine wichtige Rolle spielen.

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