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Lexikon der Biologie: Kolonie-Hybridisierung

Kolonie-Hybridisierung w, colony hybridization, colony screening, eine auch (nach ihren Erfindern) als Grunstein-Hogness-Technik bezeichnete Methode zur Identifizierung von Bakterienkolonien, die eine in einem Vektor eingebaute gesuchte DNA-Sequenz enthalten. Im Gegensatz zum Immunoscreening wird ein gesuchter Klon nicht über ein exprimiertes Genprodukt, sondern über eine DNA-Sequenz durch molekulare Hybridisierung erkannt. Dadurch können nicht nur vollständige Gene, sondern auch nicht exprimierte DNA-Bruchstücke oder rRNA-Gene in cDNA- oder genomischen DNA-Bibliotheken (Genbibliothek) gefunden werden. Bei der Kolonie-Hybridisierung werden die zu testenden Bakterienkolonien nach Transfer von einer Agar-Platte (Agar) auf geeignete Membranfilter (mittels Auflegen und Abziehen der Membranen) durch Detergentien oder Puffer mit Natriumchlorid und Natron-Lauge lysiert, die hierbei freigesetzte DNA zu Einzelsträngen denaturiert und diese an den Filtern immobilisiert (durch „backen" bei Nitrocellulose, durch UV-Licht bei Nylon-Filtern). Die so vorbereiteten Filter können mit radioaktiv oder nicht-radioaktiv markierten Gensonden (Markierung) hybridisiert werden. Mittels geeigneter Detektionssysteme können dann Kolonien identifiziert und anschließend isoliert werden, die zur Sonde komplementäre Abschnitte enthalten. Bei der Kolonie-Hybridisierung können einige hundert (low density screening) bis zu mehreren zehntausend (high density screening) Kolonien pro Agar-Platte/Filter auf das Vorhandensein der gesuchten DNA überprüft werden. Das bei der Kolonie-Hybridisierung angewandte Prinzip läßt sich auch für Phagen-Plaques anwenden (Plaque-Hybridisierung).

E.G./M.B.

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