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Lexikon der Biologie: Laser-Nephelometrie

Laser-Nephelometrie w, immunologische Methode, mit der die Konzentration eines Proteins exakt bestimmt werden kann. Die zu untersuchende Probe wird mit einer spezifischen Antikörperlösung inkubiert, wodurch es zur Ausbildung von Antigen-Antikörper-Komplexen kommt. Da die Antikörper im Überschuß zugesetzt werden, ist die Konzentration dieser Komplexe der Antigen-Konzentration der Probe proportional. Trifft ein von einer Strahlungsquelle (Laser) ausgesendeter Primärstrahl auf die Meßlösung ( vgl. Abb. ), so wird das Licht an den Antigen-Antikörper-Komplexen kegelförmig gestreut (Rayleigh-Debye-Streuung). Dieses Streulicht wird photometrisch bestimmt (Endpunktverfahren oder kinetische Methode, optischer Test, Photometer). Die Auswertung erfolgt über eine Eichkurve (Eichgerade), die mit Hilfe von Referenzstandards erstellt wurde. Die Konzentration der gesuchten Moleküle kann auch nach folgender Formel berechnet werden:
I = I0 n d6f/(r2λ4)
(n = Teilchenzahl, d = Durchmesser der Teilchen, I0 = Intensität des eingestrahlten Lichts, I = Intensität des Streulichts, f = Faktor, der den Brechungsindex der Teilchen und die Winkelverteilung der Strahlung berücksichtigt, r = Abstand Strahlungsquelle – Küvette, λ = Wellenlänge des Lichts).



Laser-Nephelometrie

Das in der Laser-Nephelometrie verwendete Meßgerät wird als Laser-Nephelometer bezeichnet. Die Abb. zeigt eine schematische Darstellung eines solchen Geräts. Als Strahlungsquelle dienen Leuchtdioden (L) oder Halogenlampen. Durch ein Mikroskopobjektiv (Sm) wird ein Primärstrahl (Ps) erzeugt, der über einen Umlenkspiegel (S) so umgeleitet wird, daß er auf die Küvette (K), welche die Analysenlösung enthält, fällt. Durch die sich in Lösung befindenden Antigen-Antikörper-Komplexe wird das Licht in einer charakteristischen Weise kegelförmig gestreut. Die Intensität des Streulichts (Sl) hängt von der Wellenlänge und der Intensität des Primärstrahls, von der Konzentration der Antigen-Antikörper-Komplexe, deren Durchmesser sowie vom Unterschied der Brechungsindizes der Komplexe und des Analysenmediums ab. Das Streulicht und das Restlicht des Primärstrahls werden durch einen zweiten Umlenkspiegel (S) auf eine Blende (Pb) umgeleitet, die das Licht des Primärstrahls auffängt. Das verbleibende Streulicht wird durch einen Detektor (Se Strahlungsempfänger) aufgefangen und nach dem photometrischen Prinzip analysiert (G Galvanometer mit Meßwertanzeige), wobei das Endpunktverfahren, die kinetische Methode und die fixed-time-Messung (Messung zu zwei definierten Zeitpunkten und Bestimmung der Extinktionsdifferenz) zur Anwendung kommen.

Copyright 1999 Spektrum Akademischer Verlag, Heidelberg

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