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Lexikon der Biologie: Laser-Scan-Mikroskopie

Laser-Scan-Mikroskopie w [von engl. scan = abtasten], konfokale Laser-Scan-Mikroskopie, lichtmikroskopisches Verfahren zur räumlichen Darstellung auch dicker Präparate, ohne sie mit dem Mikrotom schneiden zu müssen (mikroskopische Präparationstechniken). Dabei wird der Fokus („Brennpunkt") schichtweise durch das Objekt hindurchbewegt und alles Licht, das nicht aus dem Fokus stammt, mittels einer konfokalen Lochblende vor dem Detektor weggefiltert ( vgl. Abb. ). Die Bilder der Schichten werden dann im Computer zu einem räumlichen Bild zusammengefügt. In der Regel wird mit fluoreszent gefärbten Präparaten gearbeitet. Durch Verwendung von Fluoreszenzfarbstoffen und unterschiedlichen Wellenlängen des Beobachtungs-Lasers kann die räumliche Verteilung markierter Substanzen festgehalten werden. Durch das extreme Wegfiltern muß die Anregung der Fluoreszenz mit einem starken Laser erfolgen. Alternativ dazu lassen sich inzwischen die nicht-fokalen Signale rein rechnerisch entfernen (Dekonvolution), so daß auch mit konventionellen Epifluoreszenzmikroskopen (Fluoreszenzmikroskopie) eine zerstörungsfreie, dreidimensionale Beobachtung lebender Objekte möglich wird.



Laser-Scan-Mikroskopie

Schematische Darstellung eines Laser-Scan-Mikroskops. Laserlicht wird über einen Scanner durch die Linsen eines Objektivs beugungsbegrenzt auf das Präparat fokussiert. Reflexions- bzw. Emissionslicht aus der Fokusebene und aus darunter- bzw. darüberliegenden Ebenen gelangt über den Scanner zu einem Strahlteiler, wo es aus dem Laserstrahlengang ausgekoppelt wird. Dieses ausgekoppelte Licht wird auf eine extrem kleine Blende (pinhole) fokussiert und trifft nach dem Blendenausgang auf ein Detektionssystem. Aus den im Bild dargestellten Strahlenverläufen des Reflexions- bzw. Emissionslichts wird ersichtlich, daß bei entsprechender Position des pinholes nur Licht aus der Fokusebene die Blende passieren kann, während Licht aus anderen Ebenen des Präparats wirksam unterdrückt wird.

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