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Lexikon der Biologie: Linker-scanning-Mutagenese

Linker-scanning-Mutagenese w, eine bei molekularbiologischen Arbeiten eingesetzte Technik zur Erzeugung von Mutationen (Mutagenese) unter Zuhilfenahme von Linkern. Bei dieser Technik wird das zu mutagenisierende DNA-Fragment, das meist in einem Plasmid kloniert vorliegt, mit jeweils einem Restriktionsenzym oder durch die Einwirkung von DNase I (Desoxyribonuclease) geschnitten. An die Enden werden Linker anligiert (Ligation). Eine Nachbehandlung mit einem in dem Linker schneidenden Restriktionsenzym liefert überhängende klebrige Enden (sticky ends), über die das betreffende Fragment wieder religiert werden kann. Je nach Art des zuerst eingeführten Schnitts in dem Fragment resultiert dann eine kurze Insertion oder unter Umständen auch nur ein Austausch von einer oder wenigen Basen. Die Auswirkung dieses Eingriffs auf die ursprüngliche Sequenz kann dann in weiteren Experimenten getestet werden. So wird die Linker-scanning-Mutagenese z.B. bei der Untersuchung von für die Funktion von Promotoren oder enhancern wichtigen Sequenzen oder einzelnen Basen eingesetzt. Es können durch diese Technik schneller, einfacher und billiger große Bereiche mit kleinen Mutationen versehen werden, als wenn diese Mutationen durch einzelne Punktmutagenesen oder mit einzelnen synthetischen Oligonucleotiden hervorgerufen werden müßten.

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