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Lexikon der Biologie: methylation interference assay

methylation interference assay m, Methode zur Untersuchung von Proteinbindestellen auf DNA-Strängen. Endmarkierte (Endmarkierung von DNA-Fragmenten), partiell an N7-Resten des Guanosins methylierte DNA (DNA-Methylierung) wird mit Proteinextrakten inkubiert. Komplexierte und ungebundene DNA wird mittels eines band shifts getrennt, eluiert (eluieren), mit Alkali an G-Resten gespalten und durch denaturierende Polyacrylamid-Gelelektrophorese getrennt. Methylgruppen, die sich an Protein/DNA-Bindestellen befinden, verhindern die Komplexbildung zwischen Protein und DNA. Die zugehörige DNA findet sich in der Fraktion der ungebundenen DNA. Fehlende Banden in der G-Leiter des Autoradiogramms (Autoradiographie) der komplexierten DNA zeigen die Kontaktpunkte zwischen DNA und Protein an. footprint, Protein-DNA-Interaktion.

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