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Lexikon der Biologie: Nuclear-run-on-Transkription

Nuclear-run-on-Transkription, Nachweismethode für die Promotoraktivität (Promotor) bestimmter Gene, bei der isolierte, intakte Zellkerne mit α-32P-UTP und nicht radioaktiven Ribonucleosid-5'-triphosphaten inkubiert werden. Dabei werden nur zum Zeitpunkt des Zellaufschlusses bereits initiierte RNA-Transkripte weiter verlängert und radioaktiv markiert. Nach Verdau von DNA und Proteinen durch Desoxyribonucleasen und Proteinase K wird die RNA extrahiert. Die Identifizierung und Quantifizierung der radioaktiv markierten RNA (Markierung) erfolgt durch Hybridisierung mit einer dazu komplementären, auf einer Nitrocellulosemembran immobilisierten DNA-Sonde (nach dem Prinzip einer reversen dot- bzw. slot-blot-Methode). Die Menge an radioaktiven RNA-Transkripten ist ein Maß für die Promotoraktivität zum Zeitpunkt des Zellaufschlusses. Das Verfahren eignet sich vor allem, um in-vivo-Schwankungen der Transkription bestimmter RNAs in Abhängigkeit von Zellwachstum und Zelldifferenzierung zu analysieren.

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