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Lexikon der Biologie: Sanger-Verfahren

Sanger-Verfahren [benannt nach F. Sanger], Didesoxy-Methode nach Sanger, 1977 eingeführtes enzymatisches Analyseverfahren zur Sequenzierung von Nucleinsäuren. Das Verfahren basiert auf einer primer-abhängigen, sequenzspezifischen enzymatischen DNA-Synthese unter Verwendung von definierten Synthese-Terminatoren. Beim Sanger-Verfahren wird mit Hilfe der DNA-Polymerase I die Sequenz einer Einzelstrang-DNA kopiert, wobei als primer ein kurzes, zur zu untersuchenden DNA komplementäres DNA-Fragment verwendet wird. Im Analysenansatz ist neben radioaktivem ATP (Adenosintriphosphat), GTP (Guanosin-5'-triphosphat), CTP (Cytidintriphosphat) und TTP (Thymidin-5'-triphosphat) noch ein 2',3'-Didesoxyanalogon eines Nucleosidtriphosphats enthalten, das, wenn es durch die DNA-Polymerase in die wachsende Nucleinsäure eingebaut wird, einen Abbruch des Polymerisationsvorgangs bewirkt. Auf diese Weise entstehen DNA-Fragmente verschiedener Länge, die elektrophoretisch (Elektrophorese) getrennt und durch Autoradiographie ausgewertet werden können. Werden 4 Reaktionsansätze mit jeweils unterschiedlichen Didesoxyanaloga parallel verarbeitet und elektrophoretisch getrennt, so kann man anhand der Schwärzung im Autoradiogramm die Basensequenz des zu analysierenden DNA-Strangs ablesen. Die Sanger-Sequenzierung stellt gegenüber dem älteren Verfahren der chemischen Sequenzierung nach Maxam und Gilbert (Maxam-Gilbert-Methode) eine wesentlich kostengünstigere und schnellere Alternative dar. 2,4-Dinitrofluorbenzol, DNA-Sequenzer.

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