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Lexikon der Biologie: self-priming

self-primings, ein bei der Synthese von cDNA eingesetztes Verfahren zur Synthese des Zweitstrangs der cDNA. Hierbei wird der nach Synthese des Erststrangs in einem DNA/RNA-Hybrid vorliegende RNA-Anteil durch Hitze-Denaturierung, RNase H- oder Alkali-Behandlung entfernt. Der nun als Einzelstrang vorliegende cDNA-Erststrang bildet unter diesen Umständen an seinem 3'-OH-Ende, das dem 5'-Ende der kopierten mRNA entspricht, kleine Haarnadelschleifen aus. Das freie 3'-OH-Ende dieses zurückgefalteten Bereichs kann nun wiederum als primer für die Synthese des Zweitstrangs durch Klenow-Fragment oder DNA-Polymerase I (DNA-Polymerasen) mit dem Erststrang als Matrize dienen. Es sind also unter Ausnutzung des self-priming keine zusätzlichen Schritte zur Schaffung von Startstellen für die Zweitstrangsynthese nötig. Der Erststrang selbst stellt den primer für die Zweitstrangsynthese zur Verfügung. Die Haarnadelschleife wird später im allgemeinen vor der weiteren Verwendung der kompletten cDNA durch Einwirkung von S1-Nuclease entfernt. priming.

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