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Lexikon der Biologie: site-directed mutagenesis

site-directed mutagenesis, site-specific mutagenesis, ortsspezifische Mutagenese, zielgerichtete Mutagenese, ein experimentelles Verfahren, mit dem gezielt eine Mutation (Insertion, Deletion oder einzelne Basenpaaraustausche [Basenaustauschmutationen]) an einer bestimmten bekannten Stelle innerhalb eines Gens eingeführt werden kann. Die Methode kann z.B. dazu eingesetzt werden, um Aminosäuren im katalytischen Zentrum eines Enzyms auszutauschen oder aber um bestimmte Sequenzmotive zu verändern, die im Promotor eines Gens liegen (Protein-DNA-Interaktion). Dabei werden in-vitro- (in-vitro-Mutagenese) und in-vivo-Techniken miteinander kombiniert. Das zu analysierende Gen wird zunächst in einen Klonierungsvektor einkloniert. Mit Hilfe eines synthetischen Oligonucleotids (Oligonucleotidsynthese), das die gewünschte Punktmutation enthält, wird durch den Einsatz von DNA-Polymerasen und DNA-Ligasen ein mutierter DNA-Strang erzeugt, der nach Einschleusen in Zellen zur Bildung des gewünschten veränderten Genprodukts bzw. zur Untersuchung der Veränderung selbst verwendet wird. Oligonucleotid-Mutagenese, site specific mutation, Smith (M.).

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