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Lexikon der Biologie: slot-blot-Methode

slot-blot-Methode w, dot-blot-Methode, eine Methode zum qualitativen und semiquantitativen Nachweis von Molekülen in Probengemischen. Die Methode beruht auf der einfachen Übertragung einer Probenlösung auf Membranfilter aus Nitrocellulose oder Nylon (Nylon-Filter) durch Auftüpfeln, wobei mit in geordneten Reihen mit Schlitzen (slots) oder Löchern (dots) versehene Platten auf die Filter aufgelegt werden, um das Auftragen einer großen Anzahl von Proben zu standardisieren und zu erleichtern und die Probenvolumina zu konzentrieren. Manchmal werden die Proben durch das Anlegen eines Unterdrucks an der Unterseite der Membran auf die Membran aufgesaugt, wodurch die Probenpartikel durch Abziehen aller Flüssigkeit schneller auf die Membran aufgetrocknet und dort fixiert werden. Mit Hilfe von „slot-blots“ kann eine große Anzahl von Proben parallel untersucht werden, da der Transfer sehr schnell durchgeführt ist und die zu untersuchenden Probengemische nicht z.B. durch Gelelektrophoresen oder andere Fraktionierungen aufgetrennt werden. Die auf den Membranen aufgebrachten Proben können im Falle von DNA-Proben durch Hybridisierungen auf die Anwesenheit von Zielsequenzen untersucht werden. Im Falle von Proteinen oder anderen Verbindungen werden oft Nachweise mit spezifischen Antikörpern durchgeführt. Die slot-blot-Methode erlaubt im wesentlichen nur eine Aussage über die Anwesenheit gesuchter Moleküle in Extrakten und Präparationen, nicht jedoch Aussagen zu Molekülgewicht oder anderen Parametern. Die slot-blot-Methode gehört nicht i.e.S. zu den blotting-Techniken. Nuclear-run-on-Transkription.

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